Skip to content

Fibroblast Growth Factor 23 w onkogennej osteomalacji i hipofosfatemii powiązanej z chromosomem X cd

1 miesiąc ago

478 words

Kondycjonowaną pożywkę ze stabilnie transfekowanych komórek eksprymujących dojrzały, znakowany [V5-His] FGF-23 i [V5-His] -znakowany fragment karboksylo-końcowy (wspólnie określany jako [V5-His] rhFGF-23) zebrano co drugi dzień i utrzymywano w temperaturze -20 ° C do momentu użycia. Bakteryjne białko [V5-His] rhFGF-23 (25-251), zmutowane białko, w którym glutamina jest podstawiona argininy w pozycji 179 ([V5-His; R179Q] rhFGF-23 (25-251)) i fibroblast czynnik wzrostu 19 zostały dostarczone przez Drs. Susan Schiavi i Marlon Pragnell (Genzyme). Opracowanie testu ELISA do wykrywania FGF-23
Osiem oczyszczonych przez powinowactwo przeciwciał immobilizowano na studzienkach płytki mikrotitracyjnej i biotynylowano do późniejszego wykrywania z peroksydazą chrzanową sprzężoną z awidyną (Pierce Chemical) w celu przetestowania różnych kombinacji przeciwciał wychwytujących i wykrywających w dwu-miejscu ELISA. Najlepsze rozpoznanie i czułość do wykrywania [V5-His] rhFGF-23 obserwowano, gdy anty- [Tyr-223] FGF-23 (206-222) amid był stosowany jako przeciwciało wychwytujące i anty- [Tyr-224] Jako przeciwciało do detekcji stosowano amid FGF-23 (225-244). W teście w każdej studzience płytki do mikromiareczkowania użyto 150 .l rekombinowanej lub syntetycznej FGF-23 lub nieznanej próbki i 50 .l biotynylowanego przeciwciała wykrywającego. Po wymieszaniu i inkubacji przez 18 do 24 godzin w temperaturze pokojowej, studzienki przepłukano pięciokrotnie normalną solą fizjologiczną zawierającą 0,05% Tween 20 (350 .l na studzienkę), a następnie unieruchomiony kompleks kanapkowy inkubowano z awidyna sprzężoną z peroksydazą chrzanową (200 .l) w ciemności przez godzinę, aby umożliwić związanie kompleksu enzym-awidyna z biotynylowanym przeciwciałem. Po przepłukaniu (350 .l na studzienkę, pięć razy), enzym przyłączony do studzienek inkubowano w ciemności z roztworem substratu tetrametylobenzydyny (200 .l) przez 30 minut i natychmiast zmierzono w spektrofotometrycznym czytniku płytek przy 620 nm. Reakcję następnie zatrzymano przez dodanie M kwasu siarkowego (50 ul na studzienkę); po krótkim mieszaniu płytkę ponownie odczytano przy 450 nm. To podejście, obejmujące podwójny odczyt przy 620 i 450 nm, zapewniło, że test miał szeroki zakres dynamiczny (3 do 2300 RU na mililitr).
Osoby badane
Aby uzyskać zakres referencyjny, pobrano próbki krwi (osocze w EDTA lub surowicy) od 85 zdrowych kobiet i 62 zdrowych mężczyzn (średnia [. SD] wieku, 48,4 . 19,6 lat) i 26 dzieci (średnia wieku, 10,9 . 5,5 lat) przy prawidłowym stężeniu wapnia i fosforanów w surowicy oraz prawidłowej czynności nerek. Próbki uzyskano po tym, jak pacjenci pościły przez noc, a wszystkie pomiary wykonano z tej samej próbki krwi. Badanie zostało zatwierdzone przez komitety humanistyczne w Massachusetts General Hospital, Indiana University School of Medicine, St. Thomas Hospital, National Hyogo-Chuo Hospital i University of Uppsala. Pisemną lub ustną świadomą zgodę uzyskano przed pobraniem próbek.
Tabela 1. Tabela 1. Wyniki badań laboratoryjnych u pacjentów z udokumentowaną lub podejrzaną osteomalacją krwiopochodną oraz u pacjentów z hipofosfatemią powiązaną z chromosomem X. Zbadano 17 pacjentów z potwierdzoną lub podejrzewaną osteomalacją (tab. 1)
[podobne: dietetyk szczecin cennik, badanie ferrytyna cena, szpital bródnowski rejestracja ]
[więcej w: szpital bródnowski rejestracja, elektoralna dental clinic, biseptol antybiotyk ]

0 thoughts on “Fibroblast Growth Factor 23 w onkogennej osteomalacji i hipofosfatemii powiązanej z chromosomem X cd”