Skip to content

Wartość prognostyczna wykrywania immunocytologicznego przerzutów do szpiku kostnego w nerwiaku płodowym cd

4 miesiące ago

494 words

Szkiełka nakrywkowe zostały usunięte z zimnego przechowywania w ciągu jednego tygodnia i utrwalone przez 10 minut za pomocą 2% paraformaldehydu w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (pH 7,4); Po utrwaleniu następowała inkubacja przez 45 minut z 10% surowicą końską, przez godzinę z biotynylowanymi końskimi przeciwciałami IgG i IgM (4 .g na szkiełko, Vector Laboratories, Burlingame, CA), przez 45 minut z fenylohydrazyną (10 mmol na litr) i przez godzinę z kompleksami awidyna-biotyna-peroksydaza (9 .l roztworu podstawowego rozcieńczonego solą fizjologiczną buforowaną fosforanem do stężenia 0,5 ml na szkiełko, Vector Laboratories). 15, 23, 24 Związaną peroksydazę wizualizowano przez inkubację przez 10 godzin. minut z diaminobenzydyną z nadtlenkiem wodoru (1 g na litr, rozcieńczony w 50 mmolach buforu cytrynianowego na litr [pH 5,0]; 0,3 procent nadtlenku wodoru), a komórki wybarwiono kontrastowo hematoksyliną Mayera. Szkiełka nakrywkowe odwadniano alkoholem etylowym i ksylenem i przyłączano do szkiełek za pomocą Cytoseal (Stephens Scientific, Cornwell Corp., Denville, NJ). Przemywanie pomiędzy etapami (aż do zastosowania kompleksu awidyna-biotyna-peroksydaza) przeprowadzono z użyciem całkowicie buforowanej fosforanem soli Dulbecco zawierającej 0,2% surowicy końskiej. Dla każdego testu, pozytywną kontrolą były komórki nerwiaka niedojrzałego LA-N-1 lub LA-N-520 traktowane w tych samych warunkach; kontrole ujemne były normalnymi komórkami szpiku w badanej próbce i komórkami LA-N-1 lub LA-N-5, które traktowano jako kontrole dodatnie z wyjątkiem pominięcia mieszaniny przeciwciał monoklonalnych.
Ocena szpiku kostnego
Analizę immunocytologiczną aspiratów szpiku kostnego przeprowadzili dwaj badacze w laboratorium centralnym, podczas gdy konwencjonalna analiza próbek aspiratu i trepaniny została wykonana przez lekarzy w instytucjach kierujących. Konwencjonalna analiza aspiratów od pacjentów z chorobą stopnia III lub IV została również przeprowadzona niezależnie przez patologa z Children s Cancer Study Group. Próbki zostały wyłączone z badania, jeśli liczba komórek jądrzastych była mniejsza niż 5 x 106 na mililitr, jeśli morfologia komórki nie była możliwa do interpretacji lub jeśli konwencjonalna analiza nie była rozstrzygająca. Aspiraty szpiku kostnego ze wszystkich 197 pacjentów można było ocenić za pomocą analizy immunocytologicznej; zarówno próbki wymazy, jak i biopsję można było analizować dla 175 pacjentów (89 procent), a same wymazy testowano na 22 (11 procent).
Próbki szpiku kostnego pobrane z immunoglobuliny były analizowane bez znajomości stadium klinicznego choroby lub wyników konwencjonalnej analizy. Komórki nerwiaka zostały zdefiniowane zarówno immunologicznie (ponad 50 procent błony komórkowej na powierzchni), jak i morfologicznie (duże komórki same lub w klastrach, mała ilość cytoplazmy, nieregularne jądro, jądro i brak zlepiania się chromatyny). Aby zminimalizować możliwość wyników fałszywie pozytywnych, wykrycie dwóch komórek nowotworowych było wymagane, zanim próbka szpiku byłaby pozytywna. Ocenę ilościową komórek nerwiaka niedojrzałego wykonał dwóch niezależnych obserwatorów. Jeśli stężenie komórek nowotworowych było większe niż 0,5 procent, cztery pola po 200 komórek oceniano na co najmniej dwóch szkiełkach; jeśli stężenie nie było większe niż 0,5 procent, oceniano od dwóch do pięciu preparatów, z których każdy zawierał około 50 000 komórek
[patrz też: troponina normy, polmed targowa bydgoszcz, polmed targowa ]

0 thoughts on “Wartość prognostyczna wykrywania immunocytologicznego przerzutów do szpiku kostnego w nerwiaku płodowym cd”